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SmartBatch+ 主动式组织透明化及染色一体机的应用

发布日期:2022/10/13 9:23:57

SmartBatch+主动式组织透明化及染色一体机是基于Lifecanvas公司新研发的Clear+透明化系统迭代设计而成,高度融合原有一代主动式组织透明化SmartClear系统和主动式免疫标记SmartLabel系统所有功能,是一台功能高度集约、高通量的快速主动式透明化染色一体化设备。



用SHIELD方法透明化及染色的具体流程:(其它方法也有用到SmartBatch+一体机的,例如cubic透明化后,用其染色。此处用SHIELD方法为例来阐述SmartBatch+一体机的使用方法)




一. SHIELD固定


制备样本,以下操作都注意遮光,可用锡箔纸包裹


2.  4°C下振荡孵育。(小鼠脑20mL孵育3天,大鼠脑50mL孵育6天)

3.  将SHIEID ON Buffer预热至 37°C振荡孵育24h(小鼠脑20mL,大鼠脑40mL),





二. Smart Batch+进行脱脂

1. “Delipidation Buffer(脱脂缓冲液)” 45°C”  24 小时(小鼠脑20mL,大鼠脑40mL).

2. 一整瓶“Conduction Buffer”倒入样本仓。35mL “Delipidation Buffer” 加入样本杯。

3. 样本上机

4. 打开“Auxiliary Power(辅助电源)”,

5. 打开“Electrophoresis Power(电泳电源)”。

6. 按“Preset(预设)”直到显示“Clearing Mode(透明化模式)”。

7. 每 2-3 天更新“Delipidation Buffer(脱脂缓冲液)”。

8. 完全脱脂后,样本下机 ,PBS洗(将样本放在打光的底透台上,没有实心则透明化完成)

9. 清洗仪器

10.(不染色的话50% EasyIndex 24h,37°C ;100% EasyIndex 24h,37°C包胶成像)染色则不进行此步骤




三.Smart Batch+进行免疫标记

实验:Day0 预孵育:

室温“Primary Sample Buffer过夜。

实验:Day1 一抗标记:

1. 样本上机。

2. 一整瓶“Primary Device Buffer”倒入样本仓。

“Primary Sample Buffer” 倒入样本杯,

3. 按照要求添加抗体、血清。

4. 将“Timer(定时器)”设为 18 小时。

5. 打开“Auxiliary Power(辅助电源)、“Electrophoresis Power(电泳电源)”和“Timed Shutdown(定时关机)”。

6. 按“Preset(预设)”,直到它显示“Labeling 1 (一抗标记)”

实验:Day2一抗洗涤和固定:

1. PH<8,下机(不小于8则延长下机时间)

2. PBS洗8h,每两个小时更换一次PBS。

3. 4%PFA室温振荡过夜

实验:Day3 PFA洗涤及二抗顺序标记

1.      被动洗涤6-8h,中间更换一次溶液,37°C

2.  按照要求添加二抗,Time设定为12h 。 

3. 打开“Auxiliary Power(辅助电源),“Electrophoresis Power(电泳电源)”,打开“Timed Shutdown(定时关机)”,“Preset(预设)”,直到它显示“Labeling 2。

实验:Day4 二抗洗涤及PFA固定

二抗洗涤

1.“Secondary Sample Buffer(SS#缓冲液)”装满样本杯

2. 将“Timer(定时器)”更改为 6 h,中间更换一次溶液。

3. 打开“Auxiliary Power(辅助电源),“Electrophoresis Power(电泳电源)”,打开“Timed Shutdown(定时关机)”。

4. 清洗设备,将样本放入PBS中室温振荡

PFA固定

1. PBS洗。4% PFA固定二抗 室温振荡过夜。

2. PBS 洗,更换一次溶液。

3. 您已经完成染色了!现在可以准备开始进行 折射率匹配 。




四.折射率匹配实现样本光学透明

本实验方案需要使用 RI = 1.52 版本的 EasyIndex 。

1. 使用前建议将EasyIndex 过滤,消除里面的杂质。

2. 50% EasyIndex + 50% 蒸馏水中, 室温或37°C 下振荡孵育,过夜

3. 100% EasyIndex, 室温或37°C 下振荡孵育,过夜。

如果始终无法透明,则没有完全脱脂,只需将 EasyIndex 清洗掉并进一步透明化即可。




五.包胶

六.LS18 Plus快速高分辨光片显微成像

七. 专业的三维图像处理及分析




SmartBatch+ 主动式组织透明化及染色一体机主要是在SHIELD固定后的脱脂和染色的步骤中应用,脱脂和染色很重要,因此我们要严格按照步骤,小心操作。按照步骤中的要求,掌握好相应的试剂,温度以及时间,其中SmartBatch+简单快捷的操作,大大减少了使用者的工作量。


SmartBatch+不仅操作方便,而且容量大,可以12个小脑一起上机,适合批量处理,效果明显优于不上机处理的样本。可以自动定时关闭,不用严格按照时间进出实验室,使用者可以更加便捷的开展实验。


SHIELD固定,透明化及染色的实验流程

日期

时间

步骤

星期五

上午9:00

SHIELD-Off

星期一

上午9:00

SHIELD-On

星期二

上午9:00

脱脂液(Delipidation Buffer)孵育

星期三

上午9:00

在SmartBatch+中进行透明化

星期四

上午9:00

PBSN洗涤

星期五

下午5:00

一抗缓冲液孵浴(Primary Sample buffer)孵育

星期一

上午9:00

更换一抗缓冲液孵育(Primary Sample buffer)

下午3:00

开始一抗染色

星期二

上午9:00

检查PH值(继续电泳或者PBSN洗涤)

下午1:00

更换PBSN

下午5:00

PFA固定

星期三

上午9:00

用二抗缓冲液洗涤

下午1:00

更换二抗缓冲液

下午5:00

二抗

星期四

上午9:00

二抗染色后洗涤

上午11:00

更换缓冲液,继续洗涤

下午1:00

PBSN洗涤



操作视频




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