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NanoAssemblr在CAR-T细胞治疗的应用:SPARK制备的脂质纳米粒介导mRNA在T细胞的递送

发布日期:2019/8/27 10:39:43

CAR-T细胞治疗(Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy)是近年来研究十分火热的一种细胞免疫疗法。其是一种通过嵌合抗原受体T细胞免疫治疗肿瘤的新型靶向疗法。而CAR-T细胞疗法和其他细胞疗法如要满足临床需求,就需要更安全、可扩展的非病毒载体替代品,以减少细胞加工和制造时间。电穿孔等非病毒方法可以避免一些安全性的问题,但这要权衡转染效率和细胞活性的问题。Precision NanoSystem Inc公司的NanoAssemblr系列仪器可快速重复地生产出微升至升级别的脂质纳米粒,并在敏感、难转染细胞方面展现出较高的性能。

Precision NanoSystem Inc公司的专家们利用NanoAssemblr SPARK制备了大量不同的脂质纳米粒处方,并快速筛选出一些目标mRNA以及脂质纳米粒处方作为候选处方,随后将实现良好转染效率的脂质纳米粒直接与原发性人T细胞共孵育,再从中筛选出产生了良好转基因表达的处方。


研究首先将初步筛选出的26个候选处方分别与原发性人T细胞共孵育,通过流式细胞仪检测发现其中部分处方产生了较高的转基因表达(GFP),并且所有处方对T细胞的活性都没产生明显的影响。


随后考察上述实验中产生了较高转基因表达的三组处方在多种T细胞亚型中的转基因表达情况。结果表明,三组处方对CD4、CD8、PanT等多种T细胞亚型均产生了较高的转基因表达。


接下来分别在T细胞激活的不同阶段进行三组处方与T细胞的共培养,分别在T细胞激活前、T细胞激活后以及T细胞激活的同时加入三组处方,检测相应转基因表达的情况。结果显示,第三组处方在T细胞激活的不同阶段都产生了较高的转基因表达。


随后又在另外两组候选处方中发现高转基因表达在96小时时仍维持在较高的水平,并对这两组处方在T细胞增殖、分裂的影响进行了考察,发现基因转染并未对T细胞的增殖、分裂产生影响。


最后研究发现对不同年龄不同性别的供试者,均产生了较高的转基因效率,其中结果中偏紫色与粉色的数据点为女性,偏蓝色与绿色的数据点为男性。

从以上研究结果可以看出,利用NanoAssemblr SPARK制备的脂质纳米粒处方可以有效递送mRNA到T细胞中并实现较好的转基因效果,并且未对T细胞的活性与增殖、分裂产生影响。这为递送CAR-T细胞治疗所需的CAR受体到T细胞提供了宝贵的借鉴价值,也为使用脂质纳米粒技术在下一代CAR-T细胞疗法和其他细胞治疗方面指明了方向。





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